3高速离心沉淀外泌体离心铸造

　　差速离心仍然是常见的外泌体分离技术之一。 该方法包括几个步骤，包括1）低速离心去除细胞和凋亡碎片，2）更高速离心以消除更大的囊泡，后，3）高速离心沉淀外泌体：

　　不过需要注意的是，样本的粘度与分离的外泌体纯度有显着的相关性，因此，具有高粘度的生物样品（例如血浆和血清样本）需要更长的超速离心步骤和更高的离心速度。

　　步骤： 以300×g离心10分钟，取上清。 以2000×g离心10分钟，取上清。 10，000×g离心30分钟，取上清。 100，000×g，在4℃下持续离心90分钟，去掉上清，留下的沉淀PBS重悬后，再次以100，000×g离心90分钟。

　　尺寸排阻色谱（Size-exclusion chromatography，SEC）是基于大小而非分子量实现分离大分子。 该技术应用填充多孔聚合物微球的柱子，分子根据其直径通过微球，半径小的分子需要更长的时间才能通过色谱柱的孔隙迁移，而大分子则从色谱柱中更早地洗脱。 尺寸排阻色谱可以分离大小分子。 此外，可以将不同的洗脱溶液应用于该方法。 与离心方法相比，色谱分离已被证明具有更多优势，因为通过色谱分离的外泌体不受剪切力的影响，这可能会改变囊泡的结构。 目前，SEC是一种广泛接受的分离血液和尿液中外泌体的技术。 不过，该方法耗时较长，不适合大量样本处理。

　　超滤膜也可用于分离外泌体。根据外泌体的大小，从蛋白质和其他大分子中分离外泌体。 常见的过滤膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔径，可用于收集大于800nm、nm或200nm的外泌体，也有设计成微柱多孔硅纤毛结构以分离40-100nm外泌体：

　　不过，该方法由于过滤膜的粘附，可能会损失外泌体，并且过滤时的压力和剪切力，离心铸造可能会使外泌体变形受损。

　　基于聚合物的沉淀技术通常包括将样本与含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃温育并低速离心。用于聚合物沉淀的常见聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用这种聚合物沉淀具有许多优点，包括对分离的外泌体影响小、离心铸造pH中性等。目前大多数快速分离外泌体的商品化试剂盒都是基于此方法。 然而基于聚合物的沉淀方法可能会同时分离非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且，聚合物材料的混杂可能会影响下游分析。

　　免疫分离外泌体的原理大多是通过抗体包被的微球，特异性结合外泌体。 例如使用抗肿瘤相关HER2和EpCAM的抗体从肿瘤细胞中分离出肿瘤来源的外泌体。 然而，使用抗体包被珠子的分离不适合从大量样本中获得外泌体。

　　还有将抗体包被于ELISA中的那种板上面，直接分离后检测、分析、定量。离心铸造近的一项研究已应用免疫亲和超顺磁性纳米粒子（ISPN）来结合外泌体，研究人员通过连接抗CD63抗体和纳米粒子生成ISPN，并用它们从体液中分离外泌体。

　　下载生物谷app，随时评论、查看评论与分享，或扫描上面二维码下载相关阅读

　　PLOSPathog：引起卡波西肉瘤的病毒会劫持外泌体调控肿瘤微环境
以上信息由江苏亚立特钢有限公司整理编辑，了解更多离心铸造信息请访问http://www.jsyltg.com